Correlative light and electron microscopy
Project description – Summary – 3rd funding period
Correlative light- and electron microscopy (CLEM) techniques combine the advantages of fluorescence information on molecular status in a large overview with the benefits of high resolution sub-cellular architecture obtained in electron microscopy. Different questions and specimen need different targeting and imaging schemes as well as preservation methods and the role of the Z2 project is to guide the SFB1129 members to use suitable CLEM techniques, modify existing workflows and develop new CLEM methods tailored to study pathogen spread.
Based on CLEM methods, morphological changes have been studied at sub-cellular scale on a number of infection biology models. Whilst mostly applied to cultured cells so far, we propose to now progress on getting ultrastructural information from larger sample sizes, from cellular to organismal models.
For this, we will implement state of the art volume correlation techniques and will develop new methods that will enhance the precision and throughput of volume imaging.
Korrelative Licht- und Elektronenmikroskopie (CLEM) kombiniert die Vorteile von Fluoreszenzinformationen über den molekularen Zustand in einer großen Übersicht mit den Vorteilen einer hochauflösenden subzellulären Architektur, die in der Elektronenmikroskopie erhalten wird. Unterschiedliche Fragen und Proben erfordern unterschiedliche Targeting- und Bildgebungsschemata sowie Präparationsmethodik. Die Aufgabe des Z2-Projekts besteht darin, die Mitglieder des SFB1129 bei der Anwendung geeigneter CLEM-Techniken anzuleiten, bestehende Arbeitsabläufe zu modifizieren und neue CLEM-Methoden zu entwickeln, die auf die Untersuchung der Erregerausbreitung zugeschnitten sind.
Auf der Grundlage von CLEM-Methoden wurden morphologische Veränderungen auf subzellulärer Ebene in einer Reihe von infektionsbiologischen Modellen untersucht. Bisher wurden diese Methoden hauptsächlich auf einzelne kultivierte Zellen angewandt.
Wir schlagen nun vor, ultrastrukturelle Informationen, von zellulären bis hin zu organismischen Modellen, aus größeren Probenmengen zu gewinnen. Zu diesem Zweck werden wir modernste Volumenkorrelationstechniken einsetzen und neue Methoden entwickeln, die die Präzision und den Durchsatz der Volumendarstellung verbessern werden.
Project staff